咨詢電話：18117197628
商品貨號
PR6503
英文名稱
Parainfluenza Virus 5(PIV）
商品名稱
副流感病毒5型
產(chǎn)品分類
熒光定量PCR
規(guī)格
50T
包裝
盒裝
用途
僅供科研研究實驗
保存
-20℃避光
PCR試劑盒實驗步驟：
?準(zhǔn)備階段?：
副流感病毒5型探針法熒光定量RT-PCR在PCR管上做好標(biāo)記，并將其置于冰上或低溫金屬塊上。
按照所使用的PCR酶說明書上的體系配制反應(yīng)預(yù)混液。這是一種具有高特異性及優(yōu)良擴(kuò)增性的高保真DNA聚合酶，適用于簡單或復(fù)雜模板、短片段或長片段的PCR擴(kuò)增，并添加了單克隆抗體以在常溫條件下抑制DNA polymerase活性，允許在常溫下配制預(yù)混液。
配制反應(yīng)液時，按照順序添加RNase free water、10×PCR Buffer、dNTP Mix、引物，后加入DNA聚合酶。注意模板需在模板區(qū)加入。
預(yù)變性處理?：
將待檢測的DNA樣品與緩沖液混合，加入引物和dNTPs，然后在適當(dāng)?shù)臏囟认逻M(jìn)行預(yù)變性處理，使DNA雙鏈解開。
PCR循環(huán)?：
加入DNA聚合酶和熒光染料，在變性、復(fù)性、延伸的溫度循環(huán)中完成DNA的擴(kuò)增。
通過熒光信號的讀取和分析，得出待檢測DNA樣品的濃度和序列信息。
結(jié)果分析?：
PCR技術(shù)具有高靈敏度、高特異性和高分辨率等優(yōu)點，能夠檢測出微量的DNA，并準(zhǔn)確地檢測出DNA序列的變異和突變。
結(jié)果分析方法包括定量和相對定量，根據(jù)實驗需求選擇合適的方法進(jìn)行分析。
整個實驗過程中，需要注意試劑的配制順序、酶的使用條件、模板的添加量以及引物的濃度，以確保實驗的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。此外，實驗設(shè)計階段需要充分考慮實驗原理、操作流程、設(shè)備和試劑的選擇，以及實驗記錄的詳細(xì)性，這些都是保證實驗成功和結(jié)果可靠的關(guān)鍵因素?。
實驗流程：
1. 配制PCR反應(yīng)體系：
- 模板DNA：10-100 ng（取決于模板的復(fù)雜性和豐度）
- 引物F（正向）：0.1-1.0 μM
- 引物R（反向）：0.1-1.0 μM
- dNTPs（混合的dATP、dCTP、dGTP、dTTP）：0.2 mM each
- 10×PCR緩沖液：1×
- MgCl2：1.5-2.5 mM（根據(jù)酶的要求調(diào)整）
- DNA聚合酶：0.5-2.5 U（根據(jù)酶的活性調(diào)整）
- 無菌去離子水：補(bǔ)足至總體積（通常為20-50 μL）
2. 設(shè)置PCR程序：
- 初始變性：95°C，3-5分鐘（激活聚合酶）
- 變性：95°C，15-30秒（每個循環(huán)）
- 退火：50-65°C，15-30秒（根據(jù)引物Tm調(diào)整）
- 延伸：72°C，30-60秒/kb（根據(jù)目標(biāo)片段長度調(diào)整）
- 終延伸：72°C，5-10分鐘
- 保存：4°C
3. 執(zhí)行PCR：
- 將配制好的反應(yīng)體系放入PCR儀器中，啟動程序。
4. 電泳分析：
- PCR結(jié)束后，取少量反應(yīng)液進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，以驗證擴(kuò)增效果。
5. 結(jié)果判斷：
- 觀察電泳結(jié)果，目標(biāo)條帶應(yīng)清晰可見，無非特異性擴(kuò)增。
公司正在出售的產(chǎn)品：
|
革蜱PCR檢測試劑盒 |
Staphylococcus haemolyticus |
|
豬瘟病毒/高致病性豬藍(lán)耳病毒/口蹄疫病毒通用型（CSFV/PRRSV-M/FMDV-U）檢測試劑盒 (三重?zé)晒釶CR法) |
Staphylococcus spp |
|
豬藍(lán)耳病毒歐洲株/美洲株/高致病株檢測試劑盒（三重?zé)晒釶CR法） |
Western Equine Encephalomyelitis Virus(WEEV |
|
豬傳染性胃腸炎/豬流行性腹瀉病毒/副豬嗜血桿菌(TGEV/PEDV/HPS)檢測試劑盒(三重?zé)晒釶CR法) |
Bartonella spp |
|
豬病毒/豬急性腹瀉綜合征病毒（PDCoV/SADS）檢測試劑盒（雙重?zé)晒釶CR法） |
Guinea Pig Herpes Virus |
|
大豆轉(zhuǎn)基因DAS-68416-4/DAS-81419-2/DP356043基因檢測試劑盒（三重?zé)晒釶CR法） |
Human Papillomavirus 13(HPV |
|
乙型流感病毒Victoria系/Yamagata系（Bv/By）檢測試劑盒（雙重?zé)晒釶CR法） |
Human Herpesvirus-8(HHV |
|
鼠疫桿菌檢測試劑盒 ( 熒光 PCR 法 ) |
Reston Ebola Virus |
|
土拉弗朗西斯菌檢測試劑盒(熒光 PCR 法) |
Canine Norovirus |
|
不動桿菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Microsporum gypseum |
|
腺病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Nocardia brasiliensis |
|
1(RT-1狷羚皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Yersinia ruckeri |
|
十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 |
副流感病毒5型探針法熒光定量RT-PCRHuman Rhinovirus |
|
蜜蜂球囊菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Human T-cell Lymphoma Virus Provirus(HTLV-1） |
|
副雞禽桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
Aspergillus fumigatus |
PCR操作流程及注意事項：
一、試劑準(zhǔn)備階段
試劑準(zhǔn)備是 PCR 操作的個流程，需要在試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)的超凈工作臺或生物柜進(jìn)行，用確保無污染的移液器、槍頭及容器等進(jìn)行分裝。所有的 PCR 體系都應(yīng)該在 - 20℃ 保存，除了 ddH2O 之外，其余的試劑組份需完全融化之后再加入，以免影響濃度。配制反應(yīng)體系應(yīng)在快速進(jìn)行，以減少非特異性擴(kuò)增。體系配制完成之后應(yīng)馬上進(jìn)行 PCR 反應(yīng)。
二、樣本制備階段
樣本制備是整個 PCR 反應(yīng)中為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，在接收樣本時一定要確保樣本的密封性以及樣本編號的性。嚴(yán)格遵守操作規(guī)程進(jìn)行加樣操作，操作時候盡量少說話或者不說話。所有操作需要在生物柜內(nèi)進(jìn)行，操作前后生物柜需要進(jìn)行紫外燈，注意生物柜中物品的排放。戴手套并勤于更換，要有「無核酸觀念」 。
三、核酸擴(kuò)增
在核酸擴(kuò)增環(huán)節(jié)需要選擇質(zhì)量好的 Ep 管，裝入反應(yīng)體系的 EP 管上機(jī)前混勻、離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。在樣本檢測的同時設(shè)立對照（陽性對照、陰性對照、陰性模板、試劑對照）。同時嚴(yán)密檢測 PCR 擴(kuò)增儀的各項性能指標(biāo)，其中對 PCR 擴(kuò)增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量。
四、產(chǎn)物分析
常見問題：
1）無 CT 值出現(xiàn)：模板量不足（雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況等）
2）CT 值出現(xiàn)過晚（大于 38）：各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足
3）標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性不佳：加樣誤差、標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)降解等
4）陰性對照有信號：模板有基因組的污染
5）擴(kuò)增效率低：反應(yīng)試劑中部分成分特別是熒光染料降解、反應(yīng)抑制
6）擴(kuò)增曲線的異常：模板的濃度太高或熒光染料的降解