公司所有產(chǎn)品均不得用于臨床診斷，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。

產(chǎn)品規(guī)格：>5×105細胞數(shù)
包裝規(guī)格：1ml凍存細胞懸液或T-25培養(yǎng)瓶

細胞介紹：

肝竇內(nèi)皮細胞是肝臟非實質(zhì)細胞中數(shù)目多的細胞，約占肝非實質(zhì)細胞總數(shù)的 70%，在表型、功能上與普通血管內(nèi)皮細胞有較大差異。肝竇內(nèi)皮細胞之間缺乏細胞間連接，細胞下基底膜物質(zhì)很少，因此竇內(nèi)皮通透性較高，有利于調(diào)節(jié)物質(zhì)交換。
不同于肝細胞的自我復制，肝再生時新生 LSECs主要來自肝內(nèi)外其他細胞成分的分化替代，不少研究證實了肝再生時LSECs的骨髓源性替代。內(nèi)皮祖細胞是參與這一過程的主要細胞成分。
窗孔是肝竇內(nèi)皮細胞具特征性的結(jié)構(gòu)，從＜ 10nm至1～2μm不等，生理條件下由于窗孔結(jié)構(gòu)的存在和缺乏內(nèi)皮下完整基膜的結(jié)構(gòu)，由肝竇內(nèi)皮細胞構(gòu)成的肝竇壁是全身毛管壁中缺乏基膜的毛血管，除竇內(nèi)的血細胞外，血漿成分均能從窗孔進入Disse間隙，進行物質(zhì)交換。

1)細胞來源于人正常肝組織。
2)細胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）免yi熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細jun、酵母和真jun。
5)細胞生長方式：上皮樣，多角形細胞，貼壁培養(yǎng)。

我們推薦使用 Delf原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

操作步驟如下：

1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)鑷去除黏附的結(jié)締組織等非培養(yǎng)所需組織。再次清洗后，用手術(shù)刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當?shù)木彌_液再清洗一次。
2、消化分離：消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞，以利于進一步的培養(yǎng)，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。
3、培養(yǎng)：細胞懸液用計數(shù)板進行細胞計數(shù)。用培養(yǎng)液將細胞數(shù)調(diào)整為（2～5）×105 cells／ml，或?qū)嶒炈杳芏?，分裝于培養(yǎng)瓶中，使細胞懸液的量以覆蓋后略高于培養(yǎng)瓶底部為宜。置CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，5％CO2，37℃靜置培養(yǎng)。一般3～5d，原代培養(yǎng)細胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補加原培養(yǎng)液量1／2的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進行傳代。

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

注意事項：

1)原代培養(yǎng)的分離細胞在初次接觸體外環(huán)境時，雖然被分散成單個細胞，但它們之間的互相影響還是存在的， 而且這種影響對細胞能否存活是非常重要的。在這些細胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)， 使細胞彼此互相促進存活和生長。如果接種的細胞密度過低， 細胞之間的促生長作用很小， 雖然營養(yǎng)物質(zhì)很充足， 也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入獨立生存環(huán)境的變化過程。 如果接種的細胞密度過大，會導致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足， 代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。
2)原代培養(yǎng)時初始培養(yǎng)在組織分散和分離細胞時細胞可能會受到嚴重的損傷。適當增大原代培養(yǎng)接種的細胞密度， 給培養(yǎng)的細胞提供更多的類似于在體內(nèi)時細胞之間的相互作用， 會極大提高原代培養(yǎng)的細胞在體外存活率。待細胞適應(yīng)體外環(huán)境后進行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng)。
3)由于細胞之間的相互的內(nèi)在聯(lián)系被打破，分離細胞在體外培養(yǎng)時經(jīng)歷的生存環(huán)境改變很大，在體外存活和生長的難度相應(yīng)增加。 對于貼壁依賴性細胞來說，盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵?？梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 3h 到 5h，由于細胞懸液中帶有少量培養(yǎng)液， 細胞即可以維持存活， 又可以很快接觸到培養(yǎng)瓶底壁， 是細胞迅速黏附于底物，待細胞貼壁后，再補足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
3、分離細胞培養(yǎng)法—懸浮型細胞培養(yǎng) 。

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