下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說明書：
中文名稱：COL5α2人Ⅴ型膠原α2elisa試劑盒說明書
英文簡稱：Human Collagen Type V Alpha 2(COL5a2)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號：PH103568
規(guī)格：96T/48T
適用范圍：僅供科研使用
保存及有效期：2-8℃保存，6個月，-20℃一年

試劑和樣本的控制方法：
一、試劑
1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，已獲得國家承認(rèn)的“三證”，每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；
類風(fēng)濕因子的控制方法：
①用F(ab)2替代完整的IgG；
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；
③檢測抗原時，可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
檢測程序：
1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次，向?yàn)V紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

使用方法：
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知，酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 12μg/ml    4號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 6μg/ml     3號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 3μg/ml     2號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 1.5μg/ml   1號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
水楊酸鎂（標(biāo)準(zhǔn)品）  Magnesium salicylate  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒 ，英文名： Lptn/LTN/XCL1 ELISA Kit

司坦唑醇  Stanozolol  質(zhì)量規(guī)格：>94%,BR 小鼠細(xì)胞因子ELISA檢測試劑盒MouselymphocytefactorELISAKit 96T/48T

司坦唑醇（標(biāo)準(zhǔn)品）  Stanozolol  質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠鱗狀細(xì)胞癌抗原2(SCCA2)ELISA試劑盒 ，英文名： SCCA2 ELISA Kit

苯妥英鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Phenytoin   質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠流行性出血熱抗體(EHF-Ab)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

辛可尼?。?biāo)準(zhǔn)品）  Cinchonidine  質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA檢測試劑盒Mousethioredoxieductase,xRELISAKit 96T/48T

鹽酸安他唑啉（標(biāo)準(zhǔn)品）  Antazoline   質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA試劑盒 ，英文名： xR ELISA Kit

烏利司他  Ulipristal  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 小鼠硫氧還蛋白還原酶1(xR1)ELISA試劑盒 ，英文名： xR1 ELISA Kit

鹽酸酚芐明（標(biāo)準(zhǔn)品）  Phenoxybenzamine   質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2(TBP2)ELISA試劑盒 ，英文名： TBP2 ELISA Kit

丙那林(標(biāo)準(zhǔn)品)  Clorprenaline   質(zhì)量規(guī)格：含量測定 小鼠硫氧化還原蛋白(x)ELISA檢測試劑盒MouseThioredoxin,xELISAKit 96T/48T

貝諾酯（標(biāo)準(zhǔn)品）  BENORILATE  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠硫氧化還原蛋白(x)ELISA試劑盒 ，英文名： x ELISA Kit
HMGB1 Others Human 人 HMGB1 / HMG1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 血紅素(>95%,BR)Hematin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

敘利亞倉鼠皮膚細(xì)胞;GH-S1聚乙二醇800PEG 800質(zhì)量規(guī)格：BR

OPTN Others Human 人 Optineurin / OPTN 桿狀病-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 炔雌;炔雌醇環(huán)戊Quinestrol質(zhì)量規(guī)格：USP

卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)1酸二酯酶 (比活度：>20 U/mg，BC)Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Venom質(zhì)量規(guī)格：比活度：>20 U/mg，BC

人臍靜脈平滑肌細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞，NCI-H1563[H1563]細(xì)胞 MLTC-1(間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞)化丙啶(>95% (HPLC),BC)Propidium iodide質(zhì)量規(guī)格：>95% (HPLC),BC
Neochlorogenic acid methyl ester  123410-65-1  中文名：新綠原酸甲酯  分子式：C17H20O9    組織JAK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Ethyl 3,5-di-O-caffeoylquinate  143051-74-5  中文名：3,5-二咖啡酰奎寧酸乙酯  分子式：C27H28O12    HumanplasmaaicoagulaproteinS,PSELISAKit人血漿抗凝蛋白S(PS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3-O-(6'-O-Galloyl)-β-D-glucopyranosylmaltol  163397-38-4  中文名：  分子式：C19H20O12    兔子纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Falcarindiol  55297-87-5  中文名：  分子式：C17H24O2    Human plasminogen (Plg) ELISA Kit 人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒

1,6,2',3',6'-O-Pentaacetyl-3-O-trans-p-coumaroylsucrose  138213-63-5  中文名：  分子式：C31H38O18    HumanAi-myocardialaibody,AMAELISAKit 人抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
ELISA 試驗(yàn)時，注意事項(xiàng)如下： 
     1. 正式試驗(yàn)時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
     2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括: 
     （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     （2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。 
     （3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 
   COL5α2人Ⅴ型膠原α2elisa試劑盒說明書  （4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。