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試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)批號(hào),只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30
min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測(cè)抗原時(shí),可用2-巰基乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。
下列是公司產(chǎn)品ELISA試劑盒的詳細(xì)說(shuō)明書:
中文名稱:RIOK2人RIO激酶2免費(fèi)代測(cè)試劑盒
英文簡(jiǎn)稱:Human RIO Kinase 2(RIOK2)ELISA Kit
產(chǎn)品貨號(hào):PH103027
規(guī)格:96T/48T
適用范圍:僅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6個(gè)月,-20℃一年
使用方法:
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶。眾所周知,酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA 試驗(yàn)時(shí),注意事項(xiàng)如下:
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要**價(jià)廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
苊烯(標(biāo)準(zhǔn)品) Acenaphthylene 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 牛檸檬酸合成酶(CS)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineCiateSyhetase,CSELISAKit 96T/48T
二苯胍(標(biāo)準(zhǔn)品) Diphenyl guanidine 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品(for titrimetry),≥99.5%(HPLC) 牛凝血酶抗凝血酶Ⅲ復(fù)合物(TAT-III)試劑盒 Bovine
Thrombin-aithrombin III Complex,TAT-III ELISA Kit
13-乙酰基-9-羥基巴卡丁III(標(biāo)準(zhǔn)品) 13-Acetyl-9-dihydrobaccatin III 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99% 牛凝血因子XIIIA鏈(F13A1)試劑盒 Bovine Coagulation factor
XIII A chain,F13A1 ELISA kit
二氫丹參酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Dihydrotanshinone 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98% 牛皮質(zhì)醇(Coisol)試劑盒 Bovine Coisol ELISA Kit
硼標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:水) Boron solution 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,溶劑:水 牛葡萄糖60酸脫氫酶(G6PD)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineGlucose-6-PhosphateDehydrogenase,G6PDELISAKit
96T/48T
硼標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,基體:水) Boron solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/mL,基體:水 牛葡萄糖60酸脫氫酶(G6PD)試劑盒 Bovine Glucose-6-Phosphate
Dehydrogenase,G6PD ELISA Kit
鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3) Bismuth solution 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3 牛葡萄糖激酶(GCK)試劑盒 Bovine glucokinase,GCK ELISA Kit
銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000mg/l,溶劑:1%硫酸) Copper solution 質(zhì)量規(guī)格:1000mg/l,溶劑:1%硫酸 牛前列腺素E2(PGE2)試劑盒 Bovine Prostaglandin
E2,PGE2 ELISA Kit
銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/l,溶劑:1%硫酸) Copper solution 質(zhì)量規(guī)格:500mg/l,溶劑:1%硫酸 牛前列腺素F2α(PGF2α)試劑盒 Bovine Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit
鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml) Chromium solution 質(zhì)量規(guī)格:三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml 牛羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)試劑盒 Bovine HMG-CoA ELISA kit
IL12B Others Marmoset 狨猴 IL12B / IL-12B 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 絡(luò)塞琳(標(biāo)準(zhǔn)品)Rosarin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1絡(luò)緦(標(biāo)準(zhǔn)品)Rosin質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
HepG-2細(xì)胞,人肝癌細(xì)胞 上頜牙齦癌頸結(jié)轉(zhuǎn)移癌,GNM細(xì)胞 大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)AT7519.HClAT7-519.HCl質(zhì)量規(guī)格:>98%,多種CDK抑制劑
Jurkat,
Clone E6-1 (人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2培利替尼;貝利替尼;EKB569Pelitinib (EKB-569)質(zhì)量規(guī)格:>98%,不可逆EGFR抑制劑
Promocell
C-25110 Hepatocyte Growth MediumKIT, 肝細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基套裝 500ml雷公藤乙素(標(biāo)準(zhǔn)品)Tripdiolide質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒 96T/48T
試劑盒 組裝/原裝 Escitalopram oxalate 21
小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISAKit ELISA.
96T/48T Erythritol 中文名:赤蘚糖醇
分子式:C4H10O4 度:%
小鼠抗心0脂抗體elisa試劑盒 小鼠抗心0脂抗體試劑盒
規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠抗心0脂抗體試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠抗心0脂抗體試劑盒、小鼠抗心0脂抗體elisa試劑盒
保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
Estradiol hexahydrobenzoate
15140-27-9 中文名:環(huán)己甲酸雌二醇 分子式:C25H34O3
小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(sNP/Sm)ELISAKit ELISA.
96T/48T Erlotinib 中文名:鹽酸埃羅替尼
分子式:C22H24ClN3O4 度:98.0%
小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(sNP/Sm)ELISAKit ELISA.
96T/48T
Bis(phenylacetyl) disulfide 中文名:雙(苯乙酰)二硫化物 分子式:C16H14O2S2
RIOK2人RIO激酶2免費(fèi)代測(cè)試劑盒檢測(cè)程序:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。
8. 每孔加入100ul 終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測(cè) 吸光值。