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PCR實(shí)驗(yàn)非特異性條帶擴(kuò)增或條帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象解決方法
日期：2025-05-22 00:34
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摘要：
PCR實(shí)驗(yàn)非特異性條帶擴(kuò)增或者條帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象解決方法
1、當(dāng)引物特異性差或引物形成二聚體時(shí)，可重新設(shè)計(jì)引物或者使用巣式PCR
2、若模板或引物濃度過(guò)高，可適當(dāng)降低模板或引物濃度
3、酶量過(guò)多，則適當(dāng)減少酶量
4、Mg2+濃度偏高，則降低鎂離子濃度
5、退火溫度偏低，適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法（94變性，65左右退火與延伸）
6、循環(huán)次數(shù)過(guò)多，不僅會(huì)降低擴(kuò)增效率，且會(huì)使錯(cuò)誤摻入率增加，因此需要減少循環(huán)次數(shù)。
PCR實(shí)驗(yàn)非特異性條帶擴(kuò)增或者條帶出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象解決方法
1、當(dāng)引物特異性差或引物形成二聚體時(shí)，可重新設(shè)計(jì)引物或者使用巣式PCR
2、若模板或引物濃度過(guò)高，可適當(dāng)降低模板或引物濃度
3、酶量過(guò)多，則適當(dāng)減少酶量
4、Mg2+濃度偏高，則降低鎂離子濃度
5、退火溫度偏低，適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法（94變性，65左右退火與延伸）
6、循環(huán)次數(shù)過(guò)多，不僅會(huì)降低擴(kuò)增效率，且會(huì)使錯(cuò)誤摻入率增加，因此需要減少循環(huán)次數(shù)。