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穩(wěn)定細(xì)胞株篩選步驟
日期：2025-05-21 13:47
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摘要：
穩(wěn)定細(xì)胞株篩選步驟：
1.構(gòu)建攜帶目標(biāo)基因的載體
首先，需要將目標(biāo)基因克隆到攜帶有選擇標(biāo)記的載體中，例如含有抗生 素抗性基因的質(zhì)粒。然后將該載體轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中。
2.選擇標(biāo)記篩選
轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞需要在含有抗生 素的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。只有成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞才能夠在含有抗生 素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。
3.穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選
在完成了選擇標(biāo)記篩選后，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的篩選，以得到穩(wěn)定的細(xì)胞株。這可以通過對(duì)細(xì)胞進(jìn)行單克隆分離來實(shí)現(xiàn)。具體地，將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞在...
穩(wěn)定細(xì)胞株篩選步驟：
1.構(gòu)建攜帶目標(biāo)基因的載體
首先，需要將目標(biāo)基因克隆到攜帶有選擇標(biāo)記的載體中，例如含有抗生 素抗性基因的質(zhì)粒。然后將該載體轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中。
2.選擇標(biāo)記篩選
轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞需要在含有抗生 素的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。只有成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞才能夠在含有抗生 素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。
3.穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選
在完成了選擇標(biāo)記篩選后，需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的篩選，以得到穩(wěn)定的細(xì)胞株。這可以通過對(duì)細(xì)胞進(jìn)行單克隆分離來實(shí)現(xiàn)。具體地，將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞在96孔板中進(jìn)行單克隆分離，每個(gè)孔只保留一個(gè)細(xì)胞。然后，通過檢測(cè)細(xì)胞株的表達(dá)水平和穩(wěn)定性，篩選出較佳的穩(wěn)定細(xì)胞株。