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RT-qPCR反應(yīng)主要步驟
日期：2025-05-21 13:46
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摘要：
RT-qPCR原理的三個主要步驟：
1 反轉(zhuǎn)錄：
?使用逆轉(zhuǎn)錄酶和特定引物將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA。
?該步驟將RNA模板轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定且可擴增的DNA形式。
?反轉(zhuǎn)錄過程中使用特定引物。
2 PCR擴增：
?使用特定引物對cDNA進行PCR擴增，這些引物環(huán)繞目標區(qū)域。
?PCR是一個循環(huán)過程，呈指數(shù)級擴增DNA模板的數(shù)量。
?PCR反應(yīng)中包含熒光染料或探針，它們結(jié)合到擴增的DNA序列上并發(fā)出熒光信號。
3 熒光實時檢測：
?使用實時PCR儀器實時監(jiān)測熒光信號。
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RT-qPCR原理的三個主要步驟：
1 反轉(zhuǎn)錄：
?使用逆轉(zhuǎn)錄酶和特定引物將RNA樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA。
?該步驟將RNA模板轉(zhuǎn)化為更穩(wěn)定且可擴增的DNA形式。
?反轉(zhuǎn)錄過程中使用特定引物。
2 PCR擴增：
?使用特定引物對cDNA進行PCR擴增，這些引物環(huán)繞目標區(qū)域。
?PCR是一個循環(huán)過程，呈指數(shù)級擴增DNA模板的數(shù)量。
?PCR反應(yīng)中包含熒光染料或探針，它們結(jié)合到擴增的DNA序列上并發(fā)出熒光信號。
3 熒光實時檢測：
?使用實時PCR儀器實時監(jiān)測熒光信號。
?熒光的數(shù)量與每個PCR循環(huán)中擴增的DNA數(shù)量成比例。
?使用專業(yè)軟件分析數(shù)據(jù)以確定循環(huán)閾值（Ct）值，該值表示熒光信號達到特定閾值水平所需的循環(huán)數(shù)。Ct值用于計算原始樣品中存在的目標DNA量，從而允許進行基因表達或病毒載量等定量分析。