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大鼠心肌成纖維細胞衰老檢測方法與步驟
日期：2025-05-21 18:00
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摘要：
大鼠心肌成纖維細胞衰老檢測方法與步驟：
（1）細胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅 菌的細胞片，每孔加入1×10E5個細胞，37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞在細胞片上生長。
（2）在超凈工作臺中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，加入×1 PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。
（3）吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1 PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。
（4）吸棄×1 PBS，加X-Gal溶液以浸沒細胞片為宜，37℃孵育4~8小時...
大鼠心肌成纖維細胞衰老檢測方法與步驟：
（1）細胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅 菌的細胞片，每孔加入1×10E5個細胞，37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細胞在細胞片上生長。
（2）在超凈工作臺中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，加入×1 PBS，洗滌細胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。
（3）吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1 PBS，洗滌細胞3次，每次3分鐘。
（4）吸棄×1 PBS，加X-Gal溶液以浸沒細胞片為宜，37℃孵育4~8小時或過夜，用保鮮膜包被6孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā)。
（5）取出細胞爬片，去離子水沖洗2次，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗。
（6）將細胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I（2分鐘）→100%酒精I（5分鐘）→二甲苯I（2分鐘）→二甲苯Ⅱ（2分鐘）。
（7）中性樹膠封片。
（8）在普通光學(xué)顯微鏡下觀察衰老細胞形態(tài)。
每張片子鏡下計數(shù)400個細胞，確定X-Gal染色陽性細胞（衰老細胞）在細胞群體中的所占的百分比即衰老細胞率（藍染細胞數(shù)/總計細胞數(shù)×100%）。
細胞衰老檢測注意事項：
①X-Gal溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配。
②細胞固定時間過長或固定之后清洗不干凈，均會影響后續(xù)的酶反應(yīng)。