實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)玻璃**，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無**、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml燒杯2個； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個 
4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺； 

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及細(xì)胞化學(xué)檢測。 

2-Tetradecylcyclobutanone Telmisartan - 純品型，10mg 特征形態(tài) 固態(tài)

Tetradecylamine，certified 標(biāo)準(zhǔn)品 2,4,5-Trichlorophenol 2016-42-4 純品型，0.25G 特征形態(tài) 固態(tài)

1-十四烯 標(biāo)準(zhǔn)品 O,S-TEPP 1120-36-1 純品型，1ML 特征形態(tài) 固態(tài)
Pyr-Trp-OH  Cyclo(Phe-Trp)  Cyclo(Gly-Ser)  Cyclo(D-Ala-Pro)  (Tyr0)-C-Peptide (human)

Diprotin A  Cyclo(Phe-Ser)  Cyclo(Gly-Pro)  Cyclo(Ala-His)  C-Peptide (human),Insulin Precursor (57-87) (human)

Diprotin B  Cyclo(Phe-Pro)  Cyclo(Gly-Phe)  Cyclo(Ala-Gly)  (Tyr0)-C-Peptide (dog)

Cyclo(Val-Val)  Cyclo(Phe-Phe)  Cyclo(Gly-His)  Cyclo(Ala-Glu)  C-Peptide (dog)

Dendroaspis Natriuretic Peptide  Retrocyclin-1  GGHG  Human CMV pp65 (495-503)  Cortistatin-17 (human)
吲哚(standard for GC,>99.5%(GC))  Indole  質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,>99.5%(GC) 人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit

辛酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC))  Ethyl octanoate  質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99%(GC) 人Ⅰ型膠原C端肽(ICTP)試劑盒 Human C-telopeptide of type Ⅰ collagen,ICTP ELISA Kit

異辛醇(standard for GC, ≥99.5% (GC))  2-Ethyl-1-hexanol  質(zhì)量規(guī)格：standard for GC, ≥99.5% (GC) 人Ⅰ型膠原N末端肽(X)試劑盒 Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen,X ELISA Kit

棕櫚酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC))  Ethyl palmitate  質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99%(GC) 人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(CTX-I)試劑盒 Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-I ELISA Kit

MAEC細(xì)胞異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC))  2-Ethylhexanoic acid  質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC) 人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)試劑盒 Human cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA Kit

茴香醛(分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC))  p-Anisaldehyde  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC) 人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)試劑盒 Human procollagen Ⅰ N-terminal peptide,PⅠNP ELISA Kit

己二酸二異辛酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  Bis(2-ethylhexyl)adipate  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒 Human Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA Kit

分散藍(lán) 35(標(biāo)準(zhǔn)品)  Disperse Blue 35  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人Ⅱ型肺泡細(xì)胞表面抗原(KL-6/MUC1)試劑盒 Human KL-6/MUC1 ELISA kit

9-甲基蒽(標(biāo)準(zhǔn)品)  9-Methylanthracene  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit

二甲四氯(標(biāo)準(zhǔn)品)  MCPA  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)試劑盒 Human C-telopeptide of type Ⅱ collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
收到如何處理:
1、首先，觀察培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。